Analyse moléculaire d’une nouvelle hepcidine (HepcD)

Le cas de dromadaire, clonage et expression dans les systèmes E.coli et Pichia pastoris

La présente étude a le mérite de cloner et de caractériser, pour la première fois, un nouveau gène HepcD, avec une région codante de 252 pb, codant pour l’hepcidine de dromadaire (HepcD), constituée de trois domaines : un peptide signal de 23 acides aminés, du côté N-terminal, un prodomaine de 35 acides aminés et un peptide mature correspondant à l’hepcidine-25.

Le premier système d’expression utilisé, pour la production des hepcidines recombinantes, est le système procaryote E.coli.

Le vecteur pET-32 Ek/LIC, cloné avec la séquence synthétique codant pour l’hepcidine mature, en association avec la souche d’expression E.

coli Rosetta-gami B (DE3) s’est montré idéal pour l’expression d’une hepcidine correctement pliée et biologiquement active avec ses quatre ponts disulfures.Le deuxième système d’expression utilisé est le système eucaryote Pichia pastoris.

Le rendement de production obtenu, de HepcD-His, est de 2,8mg/L contre 0,2mg/L de Met-HepcD.

Des analogues d’hepcidines-25 de dromadaire, synthétisés chimiquement, avec un [DH1] et trois [DH3] ponts disulfures, présentent une activité antimicrobienne contre certaines bactéries et parasites pathogènes.